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IVD檢測之痛,BSA雜質(zhì)殘留替代方案——植物源重組人血清白蛋白“禾優(yōu)?OsrHSA”
來(lái)源:禾元生物| 發(fā)布時(shí)間:2023-04-04| 點(diǎn)擊量:1431


在體外診斷(In Vitro Diagnosis,IVD)行業(yè)中,BSA(Bovine serum albumin)牛血清白蛋白一直是廣泛使用的原材料之一。在各大診斷方法,比如生化、化學(xué)發(fā)光、質(zhì)譜等檢測方法中發(fā)揮重要的作用。但BSA主要是通過(guò)牛血漿提取,血清中殘留的IgG、蛋白酶、激素、脂肪酸等物質(zhì),即使經(jīng)過(guò)相關(guān)提純工藝,仍然會(huì )有微量的殘留,在一些血液樣本,尤其是微量樣本檢測時(shí),可能會(huì )對結果產(chǎn)生干擾,成為了IVD檢測的一大痛點(diǎn)。
禾優(yōu)??OsrHSA,專(zhuān)為IVD檢測而生,是一種來(lái)源于水稻胚乳細胞的重組人血清白蛋白OsrHSA,由于植物源的生產(chǎn)方式,同時(shí)經(jīng)過(guò)嚴格的提取和純化后,不含有上述干擾物質(zhì),經(jīng)內部自測和客戶(hù)反饋,禾優(yōu)?OsrHSA可以勝任BSA在IVD行業(yè)的相關(guān)應用,如保護劑,封閉劑,緩沖液,血漿基質(zhì)標準品配制等。

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一、什么是禾優(yōu)?OsrHSA?

禾優(yōu)?OsrHSA,是武漢禾元生物科技股份有限公司自主研發(fā)、生產(chǎn)的一款植物源重組人血清白蛋白,相比BSA,是利用生物工程技術(shù)重組表達,不源自動(dòng)物血清提取,具有純度高,批間差高度一致性等特點(diǎn),在中國對HSA需求量日益增大的今天,禾優(yōu)?OsrHSA無(wú)疑是IVD行業(yè)的澎湃動(dòng)力! ??
另外,與傳統的人血清白蛋白提取不同,禾優(yōu)?OsrHSA基因工程水稻胚乳細胞表達后收集純化而來(lái),整個(gè)過(guò)程從根源上解決了血液源成分的殘留,提高了產(chǎn)品整體純度,同時(shí),規?;姆N植—采收—純化生產(chǎn)工藝流程圖1使得禾優(yōu)?OsrHSA具有高度一致的批間重復性,克服了不同批次需多次測試的弊端,同時(shí)也規避了微生物重組蛋白發(fā)酵液批間不穩定,雜質(zhì)多的問(wèn)題。更好的匹配規?;a(chǎn)使用。

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圖1 禾優(yōu)?OsrHSA整體生產(chǎn)流程示意圖
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二、禾優(yōu)?OsrHSA產(chǎn)品功能檢測展示及使用反饋
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1. 使用場(chǎng)景:作為蛋白定量的標準品

HSA同BSA一樣,可廣泛應用于蛋白質(zhì)的定量檢測,特別是臨床血液、體液,臨床化學(xué)等領(lǐng)域有較多應用。禾優(yōu)?? ?OsrHSA參考商業(yè)化的BSA標準品梯度稀釋方法稀釋后,采用商業(yè)化的Bradford(Thermo Fisher)和BCA(Thermo Fisher)檢測試劑盒進(jìn)行標準曲線(xiàn)繪制,結果如圖2和圖3所示,禾優(yōu)?OsrHSA同BSA一樣,擬合出的標準曲線(xiàn)線(xiàn)性R2均大于0.99,經(jīng)準確標定后可在體外診斷領(lǐng)域中作為蛋白質(zhì)定量標準品。

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2. 使用場(chǎng)景:作為酶、酶標抗體、抗原、細胞因子等的穩定劑

體外診斷檢測試劑,如酶、酶標記的抗體、標準抗原等生物活性物質(zhì),在存儲過(guò)程中會(huì )受到溫度、pH、離子濃度、光照、酶、濕度等因素的影響,嚴重影響到試劑的穩定性。白蛋白作為血漿中含量最豐富的蛋白,心形的蛋白結構中,有17對二硫鍵,1個(gè)游離半胱氨酸,能夠結合多種物質(zhì),是血漿中非常重要的物質(zhì)轉運載體,同時(shí)具有親水疏水作用力,作為保護劑,加強與蛋白質(zhì)的疏水作用,抵抗熱變性,穩定蛋白結構。

測試例1:OsrHSA與牛血清白蛋白對酶標抗體的保護對比
測試結果:

結論:禾優(yōu)?OsrHSA作為穩定劑,在37℃下對酶標抗體的保護效果明顯優(yōu)于牛血清(圖4),且在37℃測試條件下酶促反應的信號值相對于4℃相對變化率在10%以?xún)?,穩定性較好(圖5)。

測試例2:禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對肌酸激酶的保護效果
測試結果:

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圖6 禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對肌酸激酶的保護效果

結論:放置不同時(shí)間后,加入禾優(yōu)?OsrHSA作為穩定劑,不同溫度下肌酸激酶的T/C(Test值/Control值的比值)信號比值均高于BSA,表明其穩定性較好(圖6),且保護效果不隨肌酸激酶的濃度發(fā)生變化。

測試例3:禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對不同PCT(降鈣素原)磁珠的保護效果對比
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圖7?不同濃度的禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對不同處理的降鈣素原(PCT)磁珠保護效果

結論:加入1% 禾優(yōu)?OsrHSA作為穩定劑,37℃放置相對于4℃放置的信號衰減值明顯優(yōu)于BSA(圖7)。

測試例4:禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對OsrhbFGF(重組人堿性成纖維細胞生長(cháng)因子)的保護效果對比實(shí)驗
測試結果:

圖8?禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對OsrhbFGF活性的保護效果對比

結論:25℃放置不同天數,禾優(yōu)?OsrHSA對OsrhbFGF活性保護效果均好于BSA(圖8)。
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3. 使用場(chǎng)景:作為酶、抗原、細胞因子等的稀釋劑和免疫檢測實(shí)驗中的封閉劑

在臨床血液、體液,臨床化學(xué)等領(lǐng)域中,常用免疫診斷技術(shù)對目標分子進(jìn)行定性或定量檢測。其中免疫層析,ELISA,化學(xué)發(fā)光,流式等檢測技術(shù),抗原或抗體等從高濃度稀釋至低濃度過(guò)程中,需要用惰性蛋白模擬生理環(huán)境保證其活性不受損失,分子構象能夠維持長(cháng)時(shí)間的穩定??乖蚩贵w吸附在載體上后,需要用到惰性蛋白封閉未結合位點(diǎn),減少非特異性吸附,減少交叉反應,提高檢測方法的靈敏度。
測試例1:禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對人纖維連接蛋白ELISA檢測的封閉和稀釋效果對比
測試結果

圖9?不同濃度的禾優(yōu)?OsrHSA與BSA作為人纖維連接蛋白ELISA檢測的封閉劑和稀釋劑對比效果

結論:禾優(yōu)?OsrHSA可獲得與BSA相似的封閉效果,且0.5% OsrHSA即可獲得與1% BSA的封閉和稀釋效果(圖9。
測試例2:禾優(yōu)?OsrHSA對不同處理的磁珠封閉實(shí)驗
測試結果:

表1?重組人白蛋白對不同磁珠的封閉效果

備注:表中數據為熒光免疫檢測的信號讀值。

結論:禾優(yōu)?OsrHSA對不同處理的磁珠進(jìn)行封閉后,重復測定結果顯示其RSD(相對標準偏差)值均小于10%,封閉效果較好(表1)。
測試例3:禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對吖啶反應試劑的稀釋穩定對比
測試結果:

表2?OsrHSA與BSA對吖啶稀釋液配方穩定性對比結果

結論:加入禾優(yōu)?OsrHSA的吖啶稀釋液穩定性較好(表2)。

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4. 使用場(chǎng)景:作為血清基質(zhì)對照
在臨床檢驗過(guò)程中,由于人體樣本來(lái)源復雜,受干擾影響較大,簡(jiǎn)單的光譜法容易受到樣本本身成分顏色的干擾,往往給出假陽(yáng)性或假陰性的結果,難以實(shí)現臨床應用中快速、準確、特異性地檢測類(lèi)固醇、維生素等小分子化合物。
測試例:對禾優(yōu)?OsrHSA制備的血清基質(zhì)進(jìn)行高效液相色譜串質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)雜質(zhì)測定
測試結果:
表3?禾優(yōu)?OsrHSA類(lèi)固醇含量檢測

結論:經(jīng)檢測,禾優(yōu)?OsrHSA不含有類(lèi)固醇等物質(zhì)(表3),禾優(yōu)?OsrHSA作為血清基質(zhì)對照干擾小,可保證準確性和特異性。

結語(yǔ)
禾優(yōu)?OsrHSA作為禾元生物的拳頭產(chǎn)品,劍指IVD原輔料市場(chǎng),經(jīng)過(guò)全方位多次測試,證明重組植物源人血清白蛋白禾優(yōu)?OsrHSA因其純度高,無(wú)人源動(dòng)物源物質(zhì),單批次產(chǎn)量大,批間差小的特點(diǎn),其作為封閉劑、保護劑、穩定劑和各類(lèi)試劑盒的白蛋白標準品、血清基質(zhì)時(shí)完全擁有常見(jiàn)BSA或牛血清相同或更優(yōu)的功能,產(chǎn)品也獲得了多家客戶(hù)的積極評價(jià)和續訂,擁有廣闊的市場(chǎng)應用前景。

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